论著
5-氮杂-2'脱氧胞苷对子宫颈癌SiHa细胞E-钙黏蛋白基因启动子甲基化及蛋白表达的影响
肿瘤研究与临床, 2017,29(10) : 653-657. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2017.10.002
摘要
目的

探讨特异性甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人子宫颈癌SiHa细胞E-钙黏蛋白(E-cad)基因启动子甲基化、蛋白表达情况和细胞生物学行为的影响。

方法

应用不同浓度的5-Aza-CdR处理SiHa细胞,甲基化特异性定量聚合酶链反应(QMSP)检测处理前后E-cad基因启动子CpG岛甲基化水平;选取最适浓度设定实验组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白印迹法检测E-cad mRNA及其蛋白表达情况;采用细胞黏附实验检测细胞黏附能力;采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。

结果

在5-Aza-CdR 0、1、5、10、15 μmol/L时测得E-cad基因启动子区甲基化指数(PMR)值分别为(53.0±1.6)%、(50.0±1.2)%、(44.0±1.4)%、(27.0±1.7)%、(15.0±8.2)%,且随着5-Aza-CdR浓度的增加,PMR值逐渐降低。在15 μmol/L时PMR值最低,与其他4组相比差异有统计学意义(P<0.01),选取15 μmol/L作为5-Aza-CdR后续实验浓度。与空白对照组相比较,5-Aza-CdR组中E-cad mRNA及其蛋白的表达水平均上升,差异均有统计学意义(均P<0.05);细胞黏附率、细胞侵袭抑制率和迁移抑制率均升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。

结论

5-Aza-CdR能上调子宫颈癌SiHa细胞E-cad mRNA及其蛋白的表达水平,降低细胞的侵袭及迁移能力,促进SiHa细胞黏附,同时在一定程度上逆转E-cad基因启动子区高甲基化状态。

引用本文: 陈笑, 陈亦乐, 李乐赛, 等.  5-氮杂-2'脱氧胞苷对子宫颈癌SiHa细胞E-钙黏蛋白基因启动子甲基化及蛋白表达的影响 [J]. 肿瘤研究与临床,2017,29( 10 ): 653-657. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2017.10.002
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在全球妇女恶性肿瘤中,子宫颈癌是最常见的疾病之一[1]。子宫颈癌的主要诱发因素是感染高危型人乳头瘤病毒(HPV),但感染高危型HPV亚型的患者中最终发展成子宫颈上皮内瘤变者不超过5%,其中仅0.5%~1%患者发展为子宫颈浸润癌[2]。因此子宫颈癌的发生并非单纯与HPV感染有关,其与多种抑癌基因失活,癌基因激活以及外源性致癌物起到协同作用。基因启动子异常甲基化、基因突变以及杂合子丢失是导致抑癌基因失活的主要原因,而基因启动子甲基化与细胞内DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTS)高表达相关[3]。目前检测肿瘤相关基因启动子区异常甲基化情况已成为肿瘤早期筛查的方法。本课题组在前期人子宫颈癌组织标本中证实,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)基因启动子区CpG岛高甲基化率达到89%[4]。本研究应用特异性甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用于人子宫颈癌SiHa细胞,探讨E-cad基因启动子去甲基化对细胞侵袭与迁移等生物学行为的影响,为寻找子宫颈癌新的治疗方案提供理论依据。

 
 
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