论著
miRNA-34a调控ether-à-go-go 1基因抑制骨肉瘤细胞增殖的体外研究
肿瘤研究与临床, 2017,29(4) : 217-222,226 . DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2017.04.001
摘要
目的

检测miRNA-34a(miR-34a)对于骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的调控机制。

方法

选择人骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和人成骨细胞株hFOB 1.19以及穿刺活组织检查并经病理确诊的10例骨肉瘤和10例正常骨组织标本。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-34a在各细胞株和组织中的表达。构建pcDNA/miR-34a真核表达载体并转染骨肉瘤MG-63、Saos-2细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测转染pcDNA/miR-34a前后细胞增殖、生长和裸鼠肿瘤体积的变化。采用Western blot法检测转染pcDNA/miR-34a和miR-34a抑制剂miR-34a-2'-O-甲基反义核糖核苷酸(miR-34a-2'-O-Me)前后骨肉瘤细胞株中ether-à-go-go 1(Eag1)蛋白的表达。

结果

与成骨hFOB 1.19细胞和正常骨组织相比,miR-34a在骨肉瘤细胞株和组织中表达下调。CCK-8法检测结果示,在MG-63细胞中,空白对照组、阴性对照组和miR-34a转染组72 h细胞存活率分别为(40.05±4.82)%、(36.88±4.66)%和(26.24±6.22)%,96 h细胞存活率分别为(83.55±5.95)%、(80.13±4.48)%和(30.21±7.26)%,转染pcDNA/miR-34a后72、96 h分别与空白对照组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。Saos-2细胞中,空白对照组、阴性对照组和miR-34a转染组72 h细胞存活率分别为(46.45±8.15)%、(43.33±6.89)%和(26.81±3.17)%,96 h细胞存活率分别为(84.79±4.10)%、(80.14±3.11)%和(31.77±5.17)%,转染pcDNA/miR-34a后72、96 h分别与空白对照组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。克隆形成实验结果示,转染pcDNA/miR-34a后,骨肉瘤MG-63和Saos-2细胞克隆形成数分别为(24.40±2.71)、(30.40±4.94)个,均低于空白对照组[(83.40±3.29)、(85.00±3.32)个]和阴性对照组[(80.00±3.06)、(80.60±3.29)个](均P<0.001)。裸鼠骨肉瘤生长结果显示,从转染pcDNA/miR-34a后第21天起,miR-34a转染组裸鼠肿瘤体积小于空白对照组和阴性对照组,两者差异均有统计学意义(均P<0.001)。miR-34a表达上调可抑制骨肉瘤MG-63和Saos-2细胞中Eag1的表达,而miR-34a抑制剂可诱导骨肉瘤细胞株中Eag1的表达(均P<0.001)。

结论

miR-34a作为抑癌基因可能通过调控Eag1的表达抑制骨肉瘤细胞增殖和生长,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点。

引用本文: 熊远飞, 吴进, 刘庆军, 等.  miRNA-34a调控ether-à-go-go 1基因抑制骨肉瘤细胞增殖的体外研究 [J]. 肿瘤研究与临床,2017,29( 4 ): 217-222,226 . DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2017.04.001
正文
作者信息
基金 0  关键词  0
English Abstract
评论
阅读 0  评论  0
相关资源
论文 | 视频

版权归中华医学会所有。

未经授权,不得转载、摘编本刊文章,不得使用本刊的版式设计。

除非特别声明,本刊刊出的所有文章不代表中华医学会和本刊编委会的观点。

骨肉瘤是一种起源于间叶组织的恶性骨肿瘤[1],好发于长骨的干骺端,如股骨远端和胫骨近端等[2]。骨肉瘤恶性程度高,易复发和转移[3]。即使采用外科保肢手术联合新辅助化疗的标准治疗方案,无肺转移患者5年生存率仅为60%~75%,发生肺转移患者预后更差[4]。近年来,骨肉瘤的基因治疗已经取得了一定的进展,但很多基因治疗缺乏特异性靶点,体外实验效果优于体内试验[5],因此,急需寻找更有效的治疗基因来改善骨肉瘤患者的预后。微RNA(miRNA)是长度为21~25个碱基的内源性非编码小分子RNA,广泛存在于植物、动物以及病毒等真核细胞生物中。miRNA在进化上高度保守,具有转录后基因调控功能[6],并参与调节多种生物学功能,如调节细胞发育、分化、增殖、凋亡等。近期研究发现,miRNA表达异常与多种恶性肿瘤发生密切相关[7,8],但具体的作用和机制尚不明确。本研究首先检测了miRNA-34a(miR-34a)在骨肉瘤细胞株和组织中的表达,之后采用转染技术研究了调节miR-34a的表达对骨肉瘤细胞增殖的影响,初步阐明其可能的调控机制。

 
 
展开/关闭提纲
查看图表详情
回到顶部
放大字体
缩小字体
标签
关键词
骨肉瘤
微RNAs
基因,ether-à-go-go 1
小鼠,裸
细胞增殖