论著
达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体磷酸化机制研究
肿瘤研究与临床, 2016,28(6) : 361-365. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2016.06.001
摘要
目的

探讨酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体(AR)磷酸化的机制。

方法

以HEK-293T及COS7细胞株为研究对象,野生型AR(WT-AR)载体及其突变载体AR Y267F、AR Y534F分别与Ack1或Src载体共转染细胞,Western blot方法检测AR磷酸化位点。以LNCaP细胞株为研究对象,在无雄激素条件下,用表皮生长因子(EGF)或内皮样生长因子家族成员heregulin处理后,Western blot法检测AR磷酸化状态,再加入达沙替尼或用siRNA转染法沉默Ack1或Src基因后,Western blot法观察AR磷酸化变化;反转录-实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同处理的LNCaP细胞前列腺特异抗原(PSA)以及人激肽释放酶2(hK2) mRNA的表达。

结果

转染载体后,HEK-293T细胞中Ack1激酶介导AR Tyr267特异位点磷酸化,COS7细胞中Src介导AR Tyr534特异位点磷酸化。heregulin处理LNCaP细胞后,AR Tyr267位点磷酸化;加入达沙替尼后,该位点磷酸化被抑制;Ack1被沉默后,heregulin诱导的AR Tyr267位点磷酸化亦被抑制。EGF处理LNCaP细胞后,AR Tyr534位点磷酸化;加入达沙替尼后,该位点磷酸化被抑制;Src被沉默后,EGF诱导的AR Tyr534位点磷酸化亦被抑制。EGF或heregulin可上调LNCaP细胞内源性AR靶基因PSA和hK2 mRNA水平(P<0.05),给予达沙替尼后,抑制了heregulin诱导的PSA和hK2 mRNA水平(P<0.05),但EGF所诱导的PSA mRNA及hK2 mRNA的表达水平无明显变化(P>0.05)。

结论

达沙替尼抑制AR Tyr267、AR Tyr534位点磷酸化,其通过抑制heregulin诱导的前列腺癌细胞AR Tyr267特异位点磷酸化及前列腺癌标志物PSA及hK2 mRNA的表达而发挥抗前列腺癌效应。

引用本文: 刘静, 陈悦丹, 张静, 等.  达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体磷酸化机制研究 [J]. 肿瘤研究与临床,2016,28( 6 ): 361-365. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2016.06.001
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去势治疗(androgen deprivation therapy, ADT)是治疗进展期前列腺癌的有效方法,不仅能使肿瘤细胞萎缩,而且可以改善肿瘤相关症状。但是,几乎所有患者逐渐对ADT失去反应并进展为去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC),导致治疗失败,肿瘤复发。探讨CRPC发生机制、寻找新的分子靶向药物是国内外科学家亟待解决的热点和难点课题之一[1,2,3,4]。我们的前期实验证明,通过细胞内Src酪氨酸激酶和Ack1激酶途径的雄激素受体(androgen receptor, AR)蛋白酪氨酸磷酸化对低雄激素环境下AR的激活具有重要作用,进而导致CRPC的产生[1,5,6,7,8,9]。达沙替尼为酪氨酸激酶抑制剂,可抑制bcr-abl激酶、Src家族激酶及其他许多选择性的致癌激酶,Araujo等[10]通过Ⅰ、Ⅱ期临床试验指出达沙替尼有抗CRPC作用。本研究旨在探讨达沙替尼发挥抗前列腺癌作用的机制,为CRPC的治疗提供实验依据。

 
 
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雄激素受体
磷酸化
src激酶
达沙替尼
前列腺肿瘤
Ack1激酶