论著
小干扰RNA沉默人乳头瘤病毒16E6基因对子宫颈癌SiHa细胞系中E-钙黏蛋白表达及高甲基化的影响
肿瘤研究与临床, 2016,28(1) : 6-10,20. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2016.01.002
摘要
目的

研究小干扰RNA(siRNA)沉默人乳头瘤病毒(HPV)16E6基因对子宫颈癌SiHa细胞系中E-钙黏蛋白(E-cad)表达及其基因启动子区高甲基化的影响。

方法

运用以慢病毒为载体质粒的siRNA沉默子宫颈癌SiHa细胞系中HPV16E6基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测沉默后SiHa细胞中HPV16E6 mRNA表达水平、E-cad mRNA及蛋白表达水平。用甲基化特异性PCR(MSP)法检测SiHa细胞系中E-cad基因(CDH1)启动子区甲基化情况。

结果

siRNA E6组、空载体组、空白对照组E-cad mRNA相对表达量分别为4.755± 1.085、1.224±0.840、1.327±1.221,蛋白相对表达量分别为0.616±0.019、0.325±0.016、0.299±0.015,其中siRNA E6组SiHa细胞中E-cad mRNA及蛋白相对表达量明显高于另两组,差异均有统计学意义(F= 21.346, P<0.01;F=323.398,P<0.01),而空载体组和空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与HPV16E6基因沉默前E-cad完全甲基化状态相比较,沉默后E-cad基因甲基化扩增产物呈弱阳性,其强度较空载体组及空白对照组明显减弱,而非甲基化扩增呈阳性。

结论

HPV16E6基因沉默可使子宫颈癌SiHa细胞中E-cad表达上调,同时能够降低CDH1基因启动子区高甲基化水平,可能在一定程度上扭转CDH1基因启动子区的高甲基化状态,引起E-cad重新表达。

引用本文: 张弦, 陈亦乐, 李乐赛. 小干扰RNA沉默人乳头瘤病毒16E6基因对子宫颈癌SiHa细胞系中E-钙黏蛋白表达及高甲基化的影响 [J]. 肿瘤研究与临床,2016,28( 1 ): 6-10,20. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2016.01.002
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多种恶性肿瘤中,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达缺失通常是由DNA CpG岛异常甲基化引起的[1],其中包括子宫颈癌[2]。高危型人乳头瘤病毒(HPV)是目前研究证实的子宫颈癌首要致癌因素,其编码的E6癌基因能够抑制细胞凋亡,干扰染色体稳定性,促进上皮细胞永生化的恶性发展,其中子宫颈鳞状细胞癌以HPV16亚型最为常见[3]。本课题组前期在人类子宫颈癌组织标本中已经证实,HPV16E6蛋白高表达与E-cad基因启动子区CpG岛高甲基化及E-cad蛋白表达下调有关。关于子宫颈癌中HPV调控E-cad基因启动子区异常甲基化的分子机制,国内外少有文献报道。本研究采用以慢病毒为载体质粒的小干扰RNA(siRNA)技术,进一步探索HPV16E6调控子宫颈癌细胞E-cad启动子甲基化的作用机制。

 
 
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关键词
SiHa细胞系
人乳头瘤病毒16E6
小干扰RNA
钙黏着糖蛋白类
子宫颈肿瘤
甲基化