论著
环氧合酶2慢病毒载体及其高表达乳腺癌稳定株的构建和增殖能力研究
肿瘤研究与临床, 2015,27(10) : 658-663. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.10.003
摘要
目的

构建环氧合酶2 (COX-2)慢病毒载体,并建立高表达COX-2乳腺癌细胞株MCF7,研究COX-2在乳腺癌细胞增殖中的作用。

方法

利用COX-2 PCR全长引物和COX2的cDNA载体获得COX-2编码区全长PCR产物。经限制性内切酶BamHⅠ和XholⅠ切割PCR产物及慢病毒载体plvx-DsRed-Monomer-N1,连接酶连接,转化,测序,进而获得慢病毒载体plvx-COX-2-DsRed。后经嘌呤霉素筛选,得到带有红色荧光标记的稳定高表达COX-2乳腺癌细胞系MCF7-plvx-COX-2-DsRed,并利用实时PCR和Western blot进行验证。利用平板克隆和Western blot对比高表达COX-2 MCF7细胞系与正常MCF7细胞系的增殖能力的差异。

结果

利用PCR技术获得COX-2载体后,筛选获得稳定高表达COX-2乳腺癌细胞系MCF7-plvx-COX-2-DsRed。生长曲线检测示,第2天起MCF7-plvx-COX-2-DsRed细胞较MCF7及MCF7-plvx-DsRed-Monomer-N1细胞生长速度明显增快(P<0.05),平板克隆实验亦得出一致结果。经过蛋白相对定量分析,MCF7-plvx-COX-2-DsRed细胞株较MCF7和MCF7-plvx-DsRed-Monomer-N1细胞株的c-myc的表达量多(P<0.05),β-catenin表达量减少(P<0.05)。

结论

成功构建慢病毒载体plvx-COX-2-DsRed和高表达COX-2乳腺癌细胞株,并在RNA和蛋白水平加以验证。COX-2可能通过上调c-myc的表达,增强MCF7细胞增殖能力。

引用本文: 李婧琳, 牛东革, 高鹏, 等.  环氧合酶2慢病毒载体及其高表达乳腺癌稳定株的构建和增殖能力研究 [J]. 肿瘤研究与临床,2015,27( 10 ): 658-663. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.10.003
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环氧合酶2 (COX-2)在前列腺素及其产物合成过程中有重要作用。COX-2在炎症、神经细胞和肿瘤组织中表达,而在正常组织中无表达。以往的研究主要集中于COX-2与炎症的关系等方面,近几年研究发现COX-2在多种肿瘤组织中高表达,且与肿瘤的恶性度呈正相关性。我们对COX-2基因进行克隆并构建慢病毒载体,筛选高表达COX-2的乳腺癌稳定株,发现COX-2可以通过增强Wnt-β-catenin信号通路的活性增强癌细胞的增殖能力,这为进一步研究COX-2在乳腺癌干细胞生物学行为中的作用奠定了基础。

 
 
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乳腺肿瘤
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