论著
shRNA介导沉默肺腺癌转移相关转录本1表达对人卵巢癌细胞株OVCAR3侵袭与转移的影响
肿瘤研究与临床, 2015,27(10) : 664-668,672 . DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.10.004
摘要
目的

检测肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT-1)在人卵巢癌细胞株中的表达,并探讨shRNA介导沉默MALAT-1表达对卵巢癌细胞OVCAR3生物学功能的影响。

方法

采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ES-2、SKOV3、OVCAR3、A2780 4株卵巢癌细胞中MALAT-1mRNA水平的表达差异,设计构建4条特异性干扰MALAT-1表达的shRNA-pGPU6/GFP/Neo表达载体和一条不干扰任何基因表达的空载体作为阴性对照,转染高表达MALAT-1的OVCAR3细胞,qRT-PCR筛选并鉴定有效沉默MALAT-1的shRNA序列。应用CCK-8比色法、体外黏附与划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验检测MALAT-1沉默后OVCAR3细胞生长增殖、黏附、划痕修复、迁移及侵袭能力的改变。

结果

筛选出高表达MALAT-1的OVCAR3细胞株,有效沉默MALA-1基因后,OVCAR3细胞株的增殖、划痕修复能力明显抑制,黏附能力有不同程度降低。Transwell迁移实验中,干扰组转入底层膜细胞数量为(52.17±4.48)个,低于阴性对照组的(286.50±12.23)个和空白对照组的(295.67±6.96)个;在Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜细胞数为(37.33±2.40)个,低于阴性对照组的(239.00±15.72)个和空白对照组的(222.67±20.85)个,干扰组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。

结论

利用shRNA介导沉默MALAT-1的表达可以有效抑制卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖、黏附、划痕修复以及迁移、侵袭能力,MALAT-1有望成为卵巢癌治疗的有效靶基因。

引用本文: 周艳清, 李娟, 谭琳玉, 等.  shRNA介导沉默肺腺癌转移相关转录本1表达对人卵巢癌细胞株OVCAR3侵袭与转移的影响 [J]. 肿瘤研究与临床,2015,27( 10 ): 664-668,672 . DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.10.004
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卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于子宫内膜癌和子宫颈癌,病死率位居妇科肿瘤之首,晚期患者的5年生存率仅20%~30 %。目前卵巢癌发病机制尚不清楚,且其极易转移和复发,因此探讨新的作用靶点对卵巢癌治疗极其重要[1,2]。肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT-1)最初由德国学者在研究肺腺癌转移现象时发现,是与转移及预后密切相关的长链非编码基因,其异常表达与人类多种恶性肿瘤如肺癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌、鼻咽癌等相关,具有促进恶性肿瘤细胞侵袭转移的特点[3,4,5,6,7,8]。本研究应用shRNA干扰技术,探讨沉默MALAT-1表达对人卵巢癌细胞株OVCAR3侵袭、转移等生物学行为的影响,为卵巢癌的靶向治疗提供理论基础。

 
 
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MALAT-1
肿瘤转移
RNA干扰
卵巢肿瘤
肿瘤侵润