论著
人胃腺癌原发灶与转移灶中差异蛋白表达谱的初步研究
肿瘤研究与临床, 2015,27(8) : 510-514. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.08.002
摘要
目的

利用二维差异凝胶电泳(DIGE)技术建立分辨率高和重复性好的人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中腺癌细胞的差异蛋白表达图谱,并分析差异表达蛋白质。

方法

收集、筛选6例新鲜的人胃腺癌原发灶组织及转移的淋巴结组织标本进行比较蛋白质组学研究。用非染色冰冻切片显微切割法分别获取人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中的腺癌细胞,裂解后提取蛋白,每例取等量蛋白,任选3例混合,共分成2组。用DIGE染料Cy2、Cy3、Cy5对样品分别标记,然后进行双向电泳,获得人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中腺癌细胞的差异蛋白表达图谱,最后使用Typhoon扫描仪进行图像扫描,用DeCyder-Differential分析软件进行分析,识别两者之间的差异表达蛋白质。

结果

应用非染色冰冻切片显微切割法得到较纯的原发灶与淋巴结转移灶中的癌细胞,不会因为染色问题改变蛋白所带电荷引起的2-DE图像模式的改变,提示它是一种低价、简便的样品制备方法之一。对6例胃癌原发灶与淋巴结转移灶的腺癌细胞样本进行二维差异凝胶电泳,建立了分辨率高、重复性好的差异表达图谱。分析显示差异凝胶1、差异凝胶2的蛋白质点分别为1 416个(相似点1 062个,下调点277个,上调点77个)、1 299个(相似点1 050个,下调点157个,上调点92个)。运用DeCyder-Differential软件(Biological Variation Analysis version 5.0)对Gel1、Gel2中的蛋白质点进行分析(P=0.05,阈值:>1.5倍或者<-1.5倍),获得11个差异表达的蛋白质。

结论

非染色冰冻切片显微切割法及DIGE技术是一种简单可行的蛋白质样品纯化方法,建立了分辨率高、重复性好的人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中腺癌细胞的差异蛋白表达图谱,为进一步探讨胃癌转移机制、特异性标志物筛选奠定了初步基础。

引用本文: 柴丽丽, 陈燕, 王海玮, 等.  人胃腺癌原发灶与转移灶中差异蛋白表达谱的初步研究 [J]. 肿瘤研究与临床,2015,27( 8 ): 510-514. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.08.002
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胃癌是全球发病率、病死率均较高的恶性肿瘤之一,对人类的健康和生命造成极大危害。尽管近年来外科手术、化疗和免疫疗法等治疗水平在不断提高,但胃癌患者的病死率仍居高不下,其主要原因在于腹膜、淋巴结与肝转移。胃癌患者的预后与淋巴结转移的情况密切相关,淋巴结转移是胃癌的主要转移方式。即使是早期胃癌,其淋巴结转移率也可达8%~ 15%。因此寻求更加特异性的肿瘤标志物、解决早期诊断的问题已成为研究重点。本实验利用非染色冰冻切片显微切割的方法纯化人胃癌原发灶及淋巴结转移灶中的腺癌细胞,结合二维差异凝胶电泳(2-D DIGE)进行癌细胞中差异表达蛋白质的分析,为建立胃癌的蛋白质组数据库,发现胃癌转移相关蛋白质,分析胃癌转移相关蛋白质结构和功能及揭示胃癌转移的分子机制提供依据。

 
 
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腺癌
原发灶
二维差异凝胶电泳
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淋巴转移
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胃肿瘤