论著
活化的蛋白激酶C受体1基因沉默对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响
肿瘤研究与临床, 2015,27(6) : 394-397,412. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.06.008
摘要
目的

探讨靶向沉默活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)基因对肺腺癌A549细胞化疗药物敏感性的影响及其可能作用机制。

方法

构建靶向沉默RACK1基因的重组质粒,并转染至A549细胞,设RACK1基因沉默组(RACK1-shRNA组)、空载质粒组(Vector-shRNA组)、空白对照组,运用Western blot检测转染后RACK1蛋白的表达水平。MTT法检测转染后A549细胞对顺铂、吉西他滨、培美曲塞和紫杉醇4种化疗药物敏感性的变化。Western blot检测转染后肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP)的表达。

结果

转染24 h后,RACK1-shRNA组RACK1蛋白的相对表达量为0.267±0.470,低于Vector-shRNA组的0.821±0.109及空白对照组的0.842±0.060,差异有统计学意义(F=54.438,P<0.05)。RACK1-shRNA组细胞生长明显受到抑制,该组A549细胞对顺铂、紫杉醇的敏感性增加(作用36 h RACK1-shRNA组A549细胞增殖的抑制率与Vector-shRNA组、空白对照组相比,均P<0.05)。RACK1-shRNA组中LRP、MRP蛋白相对表达量分别为0.163±0.056、0.246±0.050,与Vector-shRNA组(0.420±0.080、0.644±0.057)及空白对照组(0.444±0.041、0.617±0.031)相比均下降,差异有统计学意义(FLRP=19.430、FMRP=61.548,均P<0.05)。

结论

靶向沉默RACK1基因可提高A549细胞对铂类、紫杉醇类化疗药物的敏感性,其作用可能是通过下调LRP及MRP的表达而实现的。

引用本文: 康继辉, 杜凯丽, 梁钢, 等.  活化的蛋白激酶C受体1基因沉默对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响 [J]. 肿瘤研究与临床,2015,27( 6 ): 394-397,412. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.06.008
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肺癌是我国发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占85 %,临床上符合手术指征的早、中期NSCLC经过手术切除后,40%以上的患者仍然有复发和侵袭转移的可能,从而导致治疗失败[1,2,3],常规化疗时由于原发或继发获得性耐药常导致疗效差,有效率仅30%~50 %[4]。RACK1是一个包含有7个重复Trp-Asp 40 (WD40)序列的相对分子质量为36×103的蛋白质,与G蛋白β亚单位具有很高的同源性,约有42%的相同氨基酸[5]。作为蛋白激酶C(PKC)的锚定蛋白[6],活化的蛋白激酶C受体1 (RACK1)在细胞中能与很多关键的信号分子相互作用,可能作为癌细胞的驱动基因参与了多种肿瘤细胞的增殖、侵袭转移及化疗耐药。在前期实验中,我们课题组证实了RACK1对NSCLC的发生、发展是一个促发因素,其高表达提示预后不良[7],但其是否参与了肺腺癌的化疗抵抗鲜见报道。本研究旨在探讨靶向沉默RACK1基因后肺腺癌A549细胞对顺铂、吉西他滨、培美曲塞和紫杉醇4种不同类别化疗药物敏感性的影响,并检测对相关耐药蛋白表达的影响,为肺癌的治疗提供新的思路和实验依据。

 
 
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RNA干扰
肺腺癌A549细胞
RACK1基因