论著
Notch信号通路体外介导肺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药的分子机制研究
肿瘤研究与临床, 2015,27(5) : 298-304. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.05.003
摘要
目的

研究Notch信号通路在肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用机制。

方法

选用EGFR 19号外显子缺失突变(DelE746-A750)的人肺癌PC9细胞株以及吉非替尼获得性耐药PC9/AB2细胞株。构建靶向Notch-1的siRNA真核表达载体,转染PC9/AB2细胞。DNA直接测序法检测EGFR基因20号外显子,荧光原位杂交试验(FISH)检测Met基因扩增。Western blot实验检测EGFR、Akt和Erk蛋白、Notch受体和配体、转化生长因子β(TGF-β)受体以及上皮间质标志物E-Cadherin、Vimentin和Snail表达水平。CCK-8法测定吉非替尼对PC9和PC9/AB2细胞的增殖抑制作用。

结果

DNA直接测序法和FISH检测排除吉非替尼耐药株PC9/AB2存在T790M突变和MET扩增。Western blot检测显示PC9/AB2细胞中Notch-1表达较原代PC9细胞明显增强;其余Notch受体、配体和TGF-β受体无差异。PC9/AB2细胞上皮细胞性标志物E-Cadherin表达较PC9细胞明显下调,间质细胞性标志物Vimentin和Snail的表达较PC9明显上调。Notch-1 RNA干扰后PC9/AB2细胞Notch-1减弱,E-Cadherin表达上调,Vimentin和Snail表达明显下调。Notch-1RNA干扰后PC9/AB2细胞由细长梭形重新转变为类上皮细胞的鹅卵石形。RNA干扰下调Notch-1表达可部分逆转PC9/AB2细胞对吉非替尼耐药性、减弱锚定-不依赖性生长能力。

结论

Notch-1活化在吉非替尼获得性耐药过程中起一定作用,抑制Notch-1表达可部分逆转吉非替尼获得性耐药。

引用本文: 谢勉, 何朝生, 魏慎海. Notch信号通路体外介导肺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药的分子机制研究 [J]. 肿瘤研究与临床,2015,27( 5 ): 298-304. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.05.003
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表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼(gefitinib)一线治疗EGFR基因敏感突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)是近十余年来的重大突破。但其耐药性仍然是一个主要的临床问题。EGFR敏感突变的肺癌患者对EGFR-TKI反应率约为75 %,即约25%的患者对于EGFR-TKI的治疗无效,提示可能与TKI耐药相关[1]。EGFR-TKI耐药包括原发性耐药及继发耐药。目前认为继发耐药主要相关因素为EGFR二次突变及Met基因扩增,二者所占比例分别为50%和20%左右[2]。约30%继发耐药肿瘤没有发生二次突变或Met扩增,有关分子机制仍未明确。Notch是动物发育过程中一类重要的信号受体蛋白家族,通过与邻近细胞间的相互作用精确调控各种细胞分化。近年来发现其在肿瘤发生、发展过程中起着重要的作用。在人类中已发现4种Notch受体,包括Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4。配体有5种,包括Jagged 1、Jagged 2、Delta-like 1 (DLL1)、DLL 3、DLL 4[3]。正常的Notch信号途径由配体诱导的蛋白水解触发,从细胞膜上释放Notch胞内区(ICN)。ICN转移入核内,上调下游Su (H)(suppressor of hairless)/CBF1 (C-promotor binding protein-1, CSL蛋白)家族转录因子的活性,Notch-ICN-CSL复合物在核内的转移可激活E(Spl)/Hes (hairy enhancer of split)蛋白和NF-κB2 (p100/p52),调节下游基因的表达。Notch-1在NSCLC中的表达较为常见。在小细胞肺癌(SCLC)中却很少能检测到Notch-1表达[4]。可能由于Notch信号分子在不同肺癌中表达水平的显著差异,导致Notch-1信号激活对NSCLC是促进肿瘤细胞生长,而对SCLC则表现出抑制作用。Notch信号与多种抗肿瘤药物包括曲妥珠单抗的耐药有关。但Notch信号与肺癌EGFR-TKI耐药的关系尚不明确。本研究旨在探讨Notch信号通路介导肺癌EGFR-TKI吉非替尼获得性耐药的分子机制。

 
 
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表皮生长因子受体
Notch
上皮-间质转型
耐药