论著
microRNA-200c靶向抑制转录因子激活蛋白2α表达增强结肠癌细胞增殖能力的体外研究
肿瘤研究与临床, 2015,27(4) : 222-227. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.04.002
摘要
目的

探讨hsa-microRNA-200c对结肠癌细胞增殖能力影响的作用及相关机制。

方法

利用生物信息学数据库筛选可能与转录因子激活蛋白2α (AP-2α)特异性结合的microRNA并合成其真核表达质粒与特异干扰序列。利用脂质体介导将质粒PEZX-miR-200c、PEZX-NC、pmir-GLO-AP-2α 3'UTR、pmir-GLO与干扰序列miR-67-inhibtor、miR-200c-inhibitor转染至结肠癌HCT-116、SW480、HEK-293T细胞中。用实时荧光定量PCR法、Western blot法和免疫细胞化学染色法检测细胞中AP-2α表达情况,用CCK-8法检测细胞增殖情况,用PE标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;用双荧光素酶活性检测法判断miR-200c与AP-2α的相互作用。

结果

转染miR-200c-inhibitor的SW480(anti-miR-200c/SW480组)细胞增殖能力低于转染miR-67-inhibitor组(anti-miR-67/SW480组),同时凋亡水平高于anti-miR-67/SW480组[(78±0.7)%比(66±1.1)%,P<0.05],anti-miR-200c/SW480组AP-2α蛋白表达量高于anti-miR-67/SW480组(0.49±0.01比0.09±0.08,P<0.05)。转染PEZX-miR-200c表达质粒组HCT-116细胞(PEZX-miR-200c/HCT-116组)增殖能力高于转染PEZX-NC组(PEZX-NC/HCT-116组),同时AP-2α的mRNA和蛋白量均降低(0.67±0.07比0.51±0.09,P<0.05)。共转染PEZX-miR-200c与pmirGLO-AP-2α-3' UTR质粒组(共转实验组)HEK-293T细胞相对荧光素酶活性值明显低于共转染PEZX-miR-200c与pmir-GLO-AP-2α-3' UTR-deleted组(共转对照组)HEK-293T细胞(0.51±0.09比0.98±0.04,P<0.01)。

结论

结肠癌细胞中miR-200c通过抑制AP-2α转录后水平的表达活性增强细胞体外增殖能力。

引用本文: 樊丽君, 李美宁, 王爽, 等.  microRNA-200c靶向抑制转录因子激活蛋白2α表达增强结肠癌细胞增殖能力的体外研究 [J]. 肿瘤研究与临床,2015,27( 4 ): 222-227. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2015.04.002
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结肠癌是严重威胁人类生存的消化系统恶性肿瘤之一,其早期诊断率和5年生存率仍很低。越来越多的研究表明,在结肠癌的致癌作用中有许多非编码小分子RNA的异常表达[1]。这为结肠癌的研究提供了一条新的思路。转录因子激活蛋白2α(AP-2α)是一类重要的转录因子,最初从Hela细胞中被提取出[2]。在已经发现的五个亚型中AP-2α是第一个被研究的成员。已有研究表明,在多种肿瘤中AP-2α表达缺失或下调,在结肠癌中某些转录后水平调节机制可导致AP-2α的异常表达。microRNA(简称miRNA)在人类肿瘤发展中有重要作用,我们推测可能有某种miRNA调节AP-2α的表达,因而利用Targetscan与microRNA.org两个生物信息学数据库筛选出靶向AP-2α的miR-200c,通过分析miR-200c与AP-2α之间的相互作用研究其对结肠癌细胞增殖能力的影响。

 
 
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microRNA-200c
结肠肿瘤
转录因子激活蛋白2α